بررسی روش جدید در تعیین pk عوامل یونیزه شونده در مولکول های بیولوژیکی به طریق اسپکتروفتومتری

چکیده : شناسایی عوامل یونیزه شونده درآنزیم ها برای شناسایی مکانیسم فعالیت آنزیمی اهمیت بسزایی دارد. ثابت های یونیزاسیون بسیاری ازترکیبات تابه امروز بطورقطعی مشخص نبود و پژوهشگران مختلف بابکارگیری انواع روشهای جدید قادر به ارائه کمیات ثابتی که بایکدیگر تطبیق داشته باشد نشده اند . دراین پایان نامه روش های جدیدی برای تعیین pka ترکیبات به طریق اسپکتروفتومترpka ارائه شده است . بااین روش برای ترکیب تیامین منوفسفات pka = 6/33 بدست آمد که مربوط به گروه 4-nh2 حلقه پیریمیدین می باشد. وجود یون فلزی منیزیم در محیط سبب افزایش pka به میزان pka=6/37 گردید که نشان داد که یون فلزی قادر است برروی یونیزاسیون عامل آمین حلقه پیریمیدین تاثیر گذاشته و باعث کاهش اسیدیته این گروه گردد . طبق این روش برای دی پپتیدهستیدیل آلانین pka = 5/94 به دست آمد که برابر pka گروه ایمیدازولیوم هیستیدین می باشد . درمورد این دی پپتید اثر حلال)solvent effect(روی pka بررسی گردید و کلیه مراحل آزمایش درمحیطهای حاوی 5 درصد، 15 درصد، 30 درصد اتانل درسه آزمایش مستقل انجام شد که pk بدست آمده دراین موارد به ترتیب ، ka=6.51 , pka=6.33pka=6.15 بود. بخوبی مشاهده می شود که باافزایش درصد اتانل درمحیط وبه موازات آن کاهش پولاریته محیط، یونیزاسیون عامل یونیزه شونده (دراینجا گروه ایمیدازولیوم هیستیدین) کاهش یافته و pka افزایش می یابد . براساس این روش برای ترکیب ایمیدازول ها یدروکلراید pk=6.17 بدست آمد بخش دیگر این تحقیقات تعیین pka عوامل یونیزه شونده در سه ترکیب tp , atp , adp بود که برای این سه ترکیب مقادیر pka به ترتیب 8.4 , 8.21 , 8.24 بودکه این a ها مربوط به گروه آمین متصل به حلقه آدنین در adp و atp وآمین متصل به حلقه گوانین در gtp می باشد. سه پیک یاpka فرعی نیزدراین سه ترکیب بدست آمد که درatp برابر pka=7.50، در pka=7.32 , adp و در pka= 7.38 gtp بود که این pka هاطبق اطلاعات گزارش شده ازروش nmr میتواند بعلت پیوند هیدروژنی ایجادشده بی عامل آمین اگزوسیکلیک حلقه و عوامل فسفات باشد. دربخش دیگرآزمایش ها که به طca binding انجام شد برای دی پپتیدتریپتوفانیل گلوتامیک اسید pka=4.30 بدست آمد که مربوط به عامل کربوکسیل گلوتامات بود. درمورداین دی پپتید نیزاثر حلال)solvent effect(روی pka بررسی شد ودرمحیطهای حاوی 2/5 درصد، 3 درصد، 5 درصد اتانل به ترتیب مقادیر pka این دی پپتید برابر 4/42، 4/62 و 5/20 حاصل شد. تعیین pka این دی پپتید به روش میکروتیتراسیون pka =4/54 رابدست داد. براساس روش ca binding برای ترکیب dns - gly - asp، مقدار pka =3/37 بدست آمد که میتوان آنرابه گروه کربوکسیل آسپارتات نسبت داد. برای تعیین pka دی پپتیدگلوتامیل والین نیز از روش ca2+ binding استفاده شد و چون این ترکیب جذب uv نداشت . ازاسیدآمینه تریپتوفان به عنوان واسطه درمحیط استفاده گردید. به طریق فوق برای گروه کربوکسیل والین دو pka حاصل شد که این دو pka باافزایش غلظت تریپتوفان درمحیط ضمن افزایش ، بعلت محیط غیرقطبی واکنشی درغلظتهای بالاتر تریپتوفان به یکدیگر نزدیک شدند .